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　　核酸凝膠染料是可用于檢測瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中雙鏈DNA（dsDNA）的靈敏的染料之一。由于核酸凝膠染料對dsDNA具有更高的靈敏度，因此其特別適合用于存在污染性RNA或ssDNA可能模糊測定結(jié)果的檢測。核酸凝膠染料具有極低的背景熒光，其光譜特性與現(xiàn)有儀器中的光源和濾光鏡套件非常匹配，這使其成為與激光掃描儀配合使用的理想選擇。

 

　　核酸凝膠染料染色方案：

　　我們發(fā)現(xiàn)通過后染色實(shí)現(xiàn)了最大的靈敏度，這也消除了核酸凝膠染料干擾DNA遷移的可能性。雖然預(yù)制方案更方便，但一些DNA樣本可能會(huì)出現(xiàn)遷移，強(qiáng)烈建議凝膠運(yùn)行時(shí)間不超過2小時(shí)。建議使用以下方案。可能需要進(jìn)行一些比較以確定哪一個(gè)更符合您的需求。

　　1、后染色方案：

　?、俑鶕?jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠；

　?、谕ㄟ^將10000X儲備試劑稀釋到PH 7.5-8緩沖液中制備1X Cyber Green工作溶液；

　?、蹖⒛z放入合適的聚丙烯容器中。輕輕加入足量的1X染色溶液浸沒凝膠；

　?、茉谑覝叵螺p輕攪拌凝膠約30分鐘，避光；

　　⑤使用254nm透射儀或使用長路綠色濾光片（如SYBR濾光片或GelStar濾光片）的激光凝膠掃描儀對染色的凝膠成像。

 

　　2、預(yù)染色方案：

　?、偈褂脴?biāo)準(zhǔn)方案制備瓊脂糖凝膠溶液；

　?、谠跐沧⒛z前將10000X Cyber Green原液試劑以1：10000稀釋到凝膠溶液中并充分混合；

　?、鄹鶕?jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠；

　　④使用254nm透射儀或使用長路徑綠色濾光片的激光凝膠掃描儀對染色的凝膠成像。

 

　　3、電泳前的DNA染色：

　?、僭陔娪厩?，用1：10000稀釋的染料（TE，TBE或TAE）孵育DNA至少15分鐘。

　?、诟鶕?jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。

　　③使用254nm透射儀或使用長路綠色濾光片（如SYBR濾光片或GelStar濾光片）的激光凝膠掃描儀對染色的凝膠成像。